CRH通过CRHR1激活cAMP/PKA通路调节宫颈癌细胞的免疫逃逸和促进宫颈癌生长

摘要

目的探讨促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)及其受体(corticotropinreleasing hormone receptor 1,CRHR1)影响宫颈癌免疫逃逸和生长的途径。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)和Western blot检测宫颈癌组织、宫颈癌细胞(HeLa细胞)和人宫颈永生化上皮细胞(H8细胞)中CRH、CRHR1、CTLA-4、IL-10和TGF-β1的表达量;用不同浓度CRH(0、1、10及20 nmol/L)作用细胞48 h或用10 nmol/L CRH作用细胞不同时间点后(12、24、36及48 h),通过CCK-8法检测各组细胞的增殖能力;CRH、CRH+CRHR1选择性阻断剂安塔拉明(CRH+Antalarmin)分别作用细胞后,RT-qPCR检测细胞CTLA-4的表达量,Western blot检测细胞中cAMP、PKA蛋白的磷酸化水平和Bax、Bcl-2、IL-10和TGF-β1表达量,CCK-8法测定细胞增殖能力;CRH、CRH+PKA通路抑制剂H-89(CRH+H-89)分别作用细胞后,RT-qPCR检测细胞CTLA-4的表达量,Western blot检测细胞中cAMP、PKA蛋白的磷酸化水平和IL-10、TGF-β1、Bax和Bcl-2表达量,CCK-8法测定细胞增殖能力。结果与癌旁正常组织和H8细胞相比,宫颈癌组织和HeLa细胞中的CRH及CRHR1表达量均显著升高(P<0.01);1、10及20 nmol/L CRH作用48 h后细胞增殖能力明显高于0 nmol/L CRH处理组(P<0.01);10 nmol/L CRH作用细胞24、36和48 h后细胞增殖能力明显高于CRH作用12 h组(P<0.01)。CRH通过CRHR1激活cAMP/PKA信号通路,促进细胞的增殖以及CTLA-4、IL-10、TGF-β1的表达。和Control组相比,CRH组细胞的CTLA-4、Bcl-2、IL-10和TGF-β1表达量升高,Bax表达量明显降低;和CRH组相比,CRH+H-89组细胞的CTLA-4、Bcl-2、IL-10和TGF-β1表达量降低,Bax表达量明显升高。结论CRH通过受体CRHR1促进宫颈癌的免疫逃逸和生长,其作用机制可能与激活cAMP/PKA通路有关。