日本七鳃鳗MIF多克隆抗体的制备及应用

摘要

目的以日本七鳃鳗(Lampetra japonica)类淋巴细胞为研究对象提取总RNA,通过RT-PCR方法获得七鳃鳗MIF基因对其进行生物信息学分析。方法将MIF基因构建到原核表达载体p ET-28a上,诱导表达并纯化MIF蛋白。以可溶表达的MIF蛋白免疫新西兰兔,应用间接ELISA方法和Western blot方法检测多克隆抗体。结果 ELISA检测抗体效价为1∶512 000;Western blot结果显示该多克隆抗体能特异性的结合重组和天然MIF蛋白;流式细胞术分析确定了19.36%的七鳃鳗类淋巴细胞表达MIF分子;激光共聚焦分析技术确定MIF分子主要定位于七鳃鳗类淋巴细胞的细胞浆中。结论重组MIF蛋白表达及多克隆抗体的成功制备,为七鳃鳗免疫功能方面的相关研究奠定了基础。