红外荧光素Alexa Fluor 647标记的2型腺相关病毒保持天然的感染活性

摘要

近年来红外荧光素的研发及相应的标记技术的进展在生物医学领域的研究中备受关注,通过与尖端仪器的结合在一系列生物样本的检测中得到广泛的应用.然而,红外荧光标记技术在病毒感染生物学研究中的应用却少见报道.本文建立了Alexa Fluor 647(AF647)红外荧光素标记重组2型腺相关病毒(AAV2)的方法,并通过凝胶电泳的银染、红外荧光成像和透射电镜分析等手段,对标记病毒的结构和形态与未标记的病毒进行了细致的比较,同时进一步鉴定了其感染293T细胞后的转导活性.结果发现,AAV2在标记后的理化性质和感染活性均未发生改变.应用狭缝印迹和激光共聚焦显微成像技术,分别对标记病毒的细胞摄取效率和在宿主细胞内的分布进行描述,为红外标记AAV2在研究中的应用提供了范例.AF647标记的AAV2为腺相关病毒的感染动力学研究提供了新的手段,具有敏感度高、抗荧光漂白和低非特异干扰等优点,并且对直接有效地结合形态学分析和生化分子生物学检测,具有重要的应用价值.