G6PD通过细胞周期蛋白D1/D2调控人黑色素瘤细胞周期的进程

摘要

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)在人皮肤黑色素瘤A375细胞中处于高表达与高活性状态,但G6PD在黑色素瘤发生发展过程中的作用及其具体机制尚不明确.本文在前期运用siRNA方法构建G6PD敲减的黑色素瘤A375稳转细胞(A375-G6PDΔ)基础上,构建表达载体pBabe-puro-G6PDWT在A375-G6PDΔ细胞中过表达野生型的G6PD基因,从而构建G6PD表达恢复的稳转细胞(A375-G6PDΔ-G6PDWT).3株细胞A375-WT、A375-G6PDΔ和A375-G6PDΔ-G6PDWT经G6PD酶活性测定、MTT测定、克隆形成实验、流式细胞仪分析细胞周期和Western印迹检测.结果显示,A375-G6PDΔ-G6PDWT细胞的G6PD蛋白表达量(0.847±0.080)及其活性(0.394±0.029)分别是A375-G6PDΔ的3.28倍(P<0.01)和7.34倍(P<0.01),分别是A375-WT细胞的91.57%和2.12倍(P<0.05).与A375-WT细胞相比,A375-G6PDΔ细胞G0/G1期细胞数增加,S期细胞数减少,增殖指数PI降低了25.70%(P<0.05),细胞周期蛋白D1/D2、细胞周期蛋白E表达分别下降37.4%、54.3%(P<0.01)和17.3%;而A375-G6PDΔ-G6PDWT细胞呈现G1/S期阻滞解除,细胞周期蛋白D1/D2蛋白分别恢复到A375-WT细胞的89.5%和87.6%,细胞周期蛋白E表达未见恢复,呈现生长增殖和克隆形成率的恢复并接近于A375-WT细胞.结果提示,G6PD通过细胞周期蛋白D1/D2调控人皮肤黑色素瘤A375细胞G1期向S期转换的进程,这为黑色素瘤发病机制的研究提供了新的思路.