三氯乙烯所致小鼠免疫性肝损伤中TNF-α/TNFR1介导的WNT5A表达

摘要

目的观察三氯乙烯(TCE)致敏小鼠肝脏组织中Wnt家族成员5A(WNT5A)的表达情况,探讨肿瘤坏死因子(TNF)-α/TNF受体1(TNFR1)介导WNT5A的表达参与TCE致敏小鼠免疫性肝损伤的机制。方法无特定病原体级雌性BALB/c小鼠随机分为4组:空白对照组小鼠5只,不予任何处理;溶剂对照组小鼠5只,予丙酮与橄榄油混合溶液处理;TCE处理组小鼠18只,予TCE、丙酮和橄榄油混合物进行经皮激发与致敏;联合处理组小鼠17只,在首次激发前腹腔注射剂量为12 mg/kg体质量的TNFR1抑制剂R7050,再按照TCE处理组进行处理。在末次激发24 h后,根据皮肤评分将TCE处理组和联合处理组小鼠分为未致敏亚组和致敏亚组。末次激发72 h后处死小鼠,取肝脏组织进行组织病理学检查,以蛋白质印迹法检测TNF-α、TNFR1、白细胞介素(IL)-6和WNT5A的表达,以免疫荧光法观察WNT5A分布,以实时荧光定量聚合酶链式反应法检测Wnt5a mRNA表达。结果TCE处理组、联合组小鼠致敏率分别为38.9%(7/18)和35.3%(6/17),差异无统计学意义(P>0.05)。组织病理学检查结果显示,TCE处理组致敏亚组小鼠出现肝损伤,表现为细胞空泡样变性和形态改变,联合处理组致敏亚组小鼠肝损伤较TCE处理组致敏亚组减轻;其余4组小鼠无出现肝损伤。免疫荧光法检查结果示,TCE处理组致敏亚组小鼠肝脏组织中WNT5A蛋白荧光信号表达增多,且高于联合处理组致敏亚组;其余4组小鼠肝脏组织中WNT5A蛋白几乎不表达。TCE处理组致敏亚组小鼠肝脏组织中TNF-α、TNFR1、IL-6、WNT5A的蛋白相对表达水平和Wnt5a mRNA相对表达水平分别高于空白对照组、溶剂对照组、TCE处理组未致敏亚组、联合处理组未致敏亚组和联合处理组未致敏亚组(P值均<0.05)。结论TCE可通过介导TNF-α/TNFR1信号通路,上调WNT5A的表达,启动促炎反应,参与TCE致敏小鼠的免疫性肝损伤。TNFR1抑制剂可通过TNF-α/TNFR1信号通路抑制WNT5A的表达,减轻炎症反应,改善TCE致敏小鼠的免疫性肝损伤。