MiR-1297下调PTEN的表达参与子宫内膜癌变

摘要

已有研究证明,抑癌子PTEN(phosphatase and tensin homolog)缺失或表达下调可引起子宫内膜癌变;在喉鳞状细胞癌中miR-1297可下调PTEN的表达。然而,miR-1297下调PTEN的机制,以及是否miR-1297靶向抑制PTEN参与子宫内膜癌变尚未见报道。本研究证明,miR-1297靶向抑制PTEN基因的表达参与子宫内膜癌变。收集临床病理检查确诊为子宫内膜腺癌的癌组织及癌旁组织18例。实时定量PCR(RT-q PCR)及Western印迹结果显示,与癌旁子宫内膜比较,子宫内膜癌组织miR-1297高表达,而PTEN则呈低表达或缺失。内膜癌和癌旁内膜组织中,miR-1297与PTEN表达水平的散点图分析揭示,miR-1297的表达水平与PTEN的表达水平呈明显的负相关(内膜癌:miR-1297与PTEN的相关系数r=-0.6928,P=0.0438;癌旁组织:相关系数r=-0.4085,P<0.0001)。报告酶活性测定显示,与对照比较,p GL3-PTEN-3'-UTR-1/2/3加miR-1297模拟物共转染后,荧光素酶活性在转染的Ishikawa和ECC-1细胞中分别降低了约21%(P=0.0196)和17%(P=0.0306);相反,转染miR-1297抑制物后,两种细胞的荧光素酶活性分别升高约59%(Ishikawa:P=0.0014)和50%(ECC-1:P=0.0025)。结果提示,miR-1297可通过特异识别PTEN mRNA的3'-UTR,抑制PTEN的表达。基因转染结合Western印迹结果证明,在原代子宫内膜细胞中,过表达miR-1297模拟物导致PTEN蛋白表达下调,而其下游底物分子——磷酸化的AKT(p-AKT)表达上调;而过表达miR-1297抑制物后,PTEN表达上调,p-AKT表达下调。Connexin V/PI双染结合流式分析证明,与对照细胞(3%细胞凋亡)比较,在子宫内膜癌细胞系Ishikawa中,敲减miR-1297表达后细胞调亡明显增加(至10%),这可能与抑制miR-1297后PTEN的表达上调有关。上述结果提示,miR-1297在子宫内膜癌高表达,而PTEN低表达。上述结果还提示,miR-1297作为一个促癌子可通过特异识别PTEN mRNA的3'-UTR,抑制PTEN的表达,促进AKT磷酸化/激活,从而促进内膜癌的发生,这可能是子宫内膜癌变的发生原因之一。