孕期慢性应激通过NMDAR/CaMKⅡ信号通路致子代学习记忆能力损伤机制

摘要

目的探讨N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR)/钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路在孕期慢性应激所致子代大鼠学习记忆障碍中的作用机制。方法采用28 d慢性不可预知温和应激(在应激第7天受孕)建立孕期慢性应激大鼠模型。采用放射免疫测定法检测应激前1天和应激第1、7、14、21、28天孕鼠血浆皮质酮水平。在仔鼠出生后28和42 d称体质量,并检测血浆皮质酮水平;采用Morris水迷宫实验检测仔鼠学习记忆能力后,处死仔鼠,分离海马组织进行透射电子显微镜观察,采用实时荧光定量聚合酶链式反应和蛋白质印迹法检测海马组织NMDAR/CaMKⅡ信号通路相关蛋白mRNA和蛋白表达水平。结果模型组孕鼠血浆皮质酮水平在应激第14、21和28天均高于同时间点对照组(P值均<0.05);提示孕鼠孕期慢性应激模型成功建立。模型组仔鼠体质量低于对照组(P<0.01);模型组仔鼠出生后28和42 d血浆皮质酮水平均高于同时间点对照组(P值均<0.05)。Morris水迷宫实验结果显示,模型组仔鼠在训练的第3、4和5天逃避潜伏期均长于同时间点对照组(P值均<0.05),且呈时间依赖性缩短(P值均<0.05);模型组仔鼠跨越平台次数少于对照组(P<0.01)。与对照组比较,模型组仔鼠出现海马神经元细胞和突触超微结构病变。与对照组比较,模型组仔鼠海马组织中NMDAR 2B亚基(NR2B)、突触后致密蛋白95(Psd95)、CaMKⅡ、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(Creb)mRNA和NR2B、PSD95、磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)、磷酸化CREB(p-CREB)蛋白的相对表达水平均下降(P值均<0.05),p-CaMKⅡ/CaMKⅡ比值和p-CREB/CREB比值也下降(P值均<0.05)。结论孕期慢性应激致子代学习记忆能力下降,其机制可能与NMDAR/CaMKⅡ信号通路传导有关。