DUSP8通过JNK/p38 MAPK通路来改善LPS诱导的巨噬细胞炎症反应

摘要

双特异性磷酸酶8(dual-specificity phosphatase 8,DUSP8)是双特异性蛋白磷酸酶家族的成员之一,被报道参与多个疾病发生过程。然而,DUSP8是否参与巨噬细胞等免疫细胞炎性应答过程,目前仍未有研究证实。本研究旨在检测DUSP8在脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症反应中的表达,并探讨过表达DUSP8在巨噬细胞炎症反应的作用。利用100 ng/mL LPS刺激野生型C57BL/6小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow derived macrophage,BMDM),分别在不同时间点收取细胞,实时PCR和Western印迹检测发现LPS处理后,BMDM中DUSP8的表达水平明显降低(P<0.05),且在12 h达到最低值;随后,分别转染DUSP8过表达载体(DUSP8-EGFP)和对照载体(EGFP)于BMDM,Western印迹检测发现DUSP8-EGFP转染能够显著上调DUSP8的表达水平(P<0.05);进一步用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测发现DUSP8过表达使巨噬细胞表面分子CD80和CD86的表达显著下调(P<0.05);同时,中性红吞噬实验结果显示,DUSP8过表达后巨噬细胞的吞噬能力明显降低(P<0.05);此外,ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)检测结果显示,过表达DUSP8显著降低IL-1β,IL-6的表达水平(P<0.05);最后,Western印迹结果显示,JNK和p38 MAPK的磷酸化水平在DUSP8过表达组中明显降低(P<0.05)。以上表明,DUSP8过表达可显著改善LPS诱导的巨噬细胞炎症反应,其机制主要通过抑制JNK和p38 MAPK的活化。