SB431542抑制百草枯刺激A549细胞上皮转化机制

摘要

目的探讨转化生长因子β(TGF-β)Ⅰ型受体激酶抑制剂SB431542对百草枯诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞株A549细胞发生上皮细胞-间质转化(EMT)的影响。方法取A549细胞随机分为对照组、百草枯组和TGF-β1阻断组,每组3个样品。对照组细胞不予任何处理,百草枯组细胞予终浓度为20μmol/L的百草枯刺激,TGF-β1阻断组细胞予终浓度为20μmol/L的百草枯和终质量浓度为20μg/L的SB431542处理;培养5 d后收获细胞,在倒置相差显微镜和扫描电镜下观察细胞形态和表型特征,采用Transwell小室进行细胞迁移实验,采用免疫印迹法检测目标蛋白的表达,采用酶联免疫吸附实验检测TGF-β1水平。结果倒置相差显微镜和扫描电镜下可见,对照组A549细胞正常生长;百草枯组A549细胞发生从上皮形态向间质细胞形态的转化;TGF-β1阻断组A549细胞趋于恢复上皮细胞形状。细胞迁移实验结果显示,百草枯组穿膜细胞数量分别高于对照组和TGF-β1阻断组(P<0.05)。与对照组和TGF-β1阻断组比较,百草枯组A549细胞E-钙黏蛋白和紧密连接蛋白1相对表达水平均下降(P<0.05),波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、磷酸化Sma和Mad相关蛋白(p-Smad)2和p-Smad3相对表达水平均升高(P<0.05)。与对照组比较,百草枯组A549细胞总TGF-β1和活化型TGF-β1水平均升高(P<0.05)。结论百草枯可通过活化TGF-β1/Smads信号通路导致A549细胞发生EMT;早期使用SB431542可通过阻断TGF-β1/Smads信号通路而抑制百草枯诱导的A549细胞EMT。