JNK通过增强神经元自噬流提高大鼠缺血性脑卒中后的神经保护

摘要

为了探究应激激活蛋白激酶JNK在缺血性脑卒中后对神经元细胞的保护机制,本文采用栓线法构建雄性SD大鼠大脑中动脉梗塞(model of middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型。在自噬变化特征性时间点加入JNK激动剂茴香霉素(anisomycin, AN),随后采用Western印迹和免疫荧光检测缺血半影区自噬流通路蛋白质表达水平,分析JNK对Bcl-2-Beclin1复合物稳定性的影响和对自噬流通路的影响。结果显示:与MCAO+Veh组相比:在12 h, AN组LC3(**P<0.01)、Beclin1(**P<0.01)和Bcl-2(*P<0.05)的表达水平显著升高,而切割胱天蛋白酶(cleaved caspase-3)的表达水平显著降低(**P<0.01),以及组织蛋白酶B(cathepsin B)(***P<0.001)和LAMP1(***P<0.001)表达水平均显著升高;在第2天,AN组的组织蛋白酶B(**P<0.01)和溶酶体关联膜蛋白1(recombinant lysosomal associated membrane protein1,LAMP1)(*P<0.05)表达水平显著降低。同时,通过神经功能损伤评分、TTC染色分析JNK活性激活对MCAO大鼠神经功能损伤、脑梗死体积的影响,结果显示:与MCAO+Veh组相比,MCAO+AN组的SD大鼠脑梗死体积显著减少(12 h:***P<0.001,第2 d:*P<0.05)且神经功能评分显著降低(12 h:***P<0.001,第2 d:**P<0.01)。上述结果提示:在缺血性脑卒中的急性期,JNK活性激活促进Bcl-2-Beclin1复合物解离,使神经元凋亡向自噬转换,提高了神经元的存活;在亚急性期,JNK活性激活使自噬产物堆积导致了神经元的自噬性损伤。