真菌β-葡聚糖受体Dectin-1胞外识别区的克隆和原核表达

摘要

目的为探讨真菌β-葡聚糖受体胞外识别区相关基因的分子功能,对小鼠巨噬细胞上的Dectin-1基因进行克隆、原核表达及鉴定分析。方法以小鼠巨噬细胞总RNA为模板,用RT-PCR扩增其Dectin-1基因的细胞外糖识别域,并重组到原核表达载体pET28a(+)中,转入E.coli BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE和Western blot对目的蛋白进行检测分析鉴定。结果阳性重组质粒经Nde I和Xho I双酶切得到552 bp和5 369 bp两条片段。重组质粒测序,与GenBank上的相应序列比对完全一致,且输入片段读码框与表达载体读码框吻合。SDS-PAGE检测表达蛋白相对分子质量为22 000;Westernblot检测出特异性阳性信号。该蛋白可识别、绑定酵母多糖。结论本研究成功构建了真菌β-葡聚糖受体胞外识别区基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达相应的蛋白,为进一步探讨该基因在真菌识别中的功能奠定了基础。