检测瓜氨酸和非对称二甲基精氨酸的化学发光方法

摘要

非对称二甲基精氨酸(ADMA)是内源性一氧化氮合酶抑制剂,被公认是一种与心血管疾病、糖尿病、性功能障碍和肾功能衰竭等多种疾病密切相关的危险因子.本文通过化学发光法检测瓜氨酸或ADMA经鸟氨酸氨基甲酰转移酶(ArcB)和氨基甲酰磷酸激酶(ArcC)偶联生成的ATP,并对该方法检测的灵敏度和动态范围进行了初步评价.1)从绿脓杆菌中克隆了鸟氨酸氨基甲酰转移酶和氨基甲酰磷酸激酶,转化大肠杆菌实现高效可溶性表达,用镍柱亲和纯化得到融合蛋白,TLC薄层层析法定性和测氨法定量验证了融合蛋白活性.2)用化学发光法检测了瓜氨酸或ADMA经相应酶偶联反应后的产物ATP,并且对实验进行了优化,结果表明两者都能在偶联酶作用下催化释放ATP,相应的底物浓度检测下限为0.1μmol/L,检测结果接近正常生理血清中ADMA的浓度,且远低于正常生理血清中瓜氨酸浓度.用正常尿液样品检测结果表明,该方法可行,为下一步血清和血浆样品的检测奠定了基础.