敲减MC4R表达对牛胎儿成纤维细胞CMS系统关键因子的影响

摘要

为获得敲减黑素皮质素4受体(melanocortin-4 receptor,MC4R)基因的牛胎儿成纤维细胞,并探讨其在能量平衡神经调节系统中的作用,将构建成功并已鉴定为有效序列的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体pGSH1-GFP-MC4R,利用阳离子脂质体转染牛胎儿成纤维细胞并使用G418筛选稳定转染细胞株.利用实时荧光定量和Western印迹检测MC4R及中枢黑素皮质素系统(central melanocortin system,CMS)关键因子的表达水平变化.结果表明,在稳定转染的牛胎儿成纤维细胞系中,MC4R表达显著抑制,瘦蛋白(leptin)和阿黑色素原(POMC)表达下调,黑素皮质素拮抗物agouti相关蛋白(AGRP)和MC3R表达上调,而神经肽Y(NPY)表达无明显改变.综上所述,本研究成功获得了敲减MC4R基因表达的牛胎儿成纤维细胞.相关基因表达水平检测结果提示,MC4R的表达水平对CMS系统中的各关键基因的表达有不同的抑制或促进影响.