副溶血性弧菌三种主要溶血毒素表达体系的构建研究

摘要

目的构建副溶血性弧菌三种主要溶血毒素(TDH、TRH和TLH)的重组融合表达体系,给后续这三种溶血毒素的大量获取及其特异性抗体的制备、副溶血性弧菌的致病机理等研究提供基础材料。方法首先将副溶血性弧菌标准菌株tdh、trh与tlh基因分别接入克隆载体pGM-T,并转入E.coliTOP10,进行BamHI、HindIII双酶切鉴定和克隆测序。然后从重组克隆质粒中将tdh、trh与tlh基因目的片段分别双酶切出,将其连接到带His标签的表达载体pET30a(+)中后转入E.coliBL21(DE3)中,先通过BamHI、HindIII双酶切以鉴定所构建表达载体的准确性。接着重组表达菌株经IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE电泳和Western-blotting来分析鉴定表达结果。结果表达产物的SDS-PAGE电泳结果显示TDH在29000、TRH在30000、TLH在52000附近处出现明显的表达蛋白条带。利用His标签的特异性抗体进行Western-bloting分析,实验结果显示29000、30000、52000附近处的表达蛋白与His抗体均有特异性反应。结论成功构建了TDH、TRH和TLH溶血毒素的原核表达体系,为进一步免疫原性和特异性抗体制备奠定基础。