LncRNA MRAK052509对矽尘诱导RLE-6TN中TGF-β信号通路与纤维化影响

摘要

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MRAK052509对矽尘诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞株RLE-6TN中转化生长因子-β(TGF-β)/SMAD信号通路及下游相应纤维化因子表达的影响。方法(1)建立大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383/RLE-6TN细胞共培养体系,随机分为对照组和模型组,模型组予剂量为400 mg/m^(2)的游离二氧化硅刺激,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测2组RLE-6TN中lncRNA MRAK052509相对表达水平。(2)将RLE-6TN随机分为对照组、阴性对照组和敲减组,后2组分别以阴性对照病毒和lncRNA MRAK052509敲减病毒转染,以qPCR法检测转染效率。(3)将NR8383/RLE-6TN细胞共培养体系随机分为4组,对照组和矽肺模型组下室均种入RLE-6TN细胞,阴性对照组和敲减组下室分别种入稳定转染阴性对照病毒和lncRNA MRAK052509敲减病毒的RLE-6TN细胞。除对照组外,其余3组向Transwell上室加入剂量为400 mg/m^(2)的游离二氧化硅刺激24 h后,收集RLE-6TN。采用qPCR法检测RLE-6TN中TGF-βⅠ型受体(TGF-βRⅠ)、Smad3和纤维黏连蛋白(FN)的mRNA相对表达水平,以蛋白免疫印迹法检测RLE-6TN中TGF-βRⅠ、SMAD3、磷酸化SMAD3(p-SMAD3)、FN、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)和Ⅲ型胶原(COLⅢ)蛋白相对表达水平。结果(1)模型组RLE-6TN细胞的lncRNA MRAK052509 mRNA表达水平较对照组升高(P<0.01)。(2)敲减组RLE-6TN中lncRNA MRAK052509 mRNA相对表达水平分别低于空白对照组和阴性对照组(P值均<0.05)。(3)与对照组比较,模型组RLE-6TN中TGF-βRⅠ、Smad3、FN的mRNA相对表达水平和TGF-βRⅠ、SMAD3、p-SMAD3、FN、COLⅠ、COLⅢ蛋白相对表达水平均升高(P值均<0.05);与矽肺模型组和阴性对照组比较,敲减组RLE-6TN中上述指标相对表达水平均下降(P值均<0.05)。结论敲减LncRNA MRAK052509可通过抑制TGF-βRⅠ的表达,阻断TGF-β/SMAD信号通路,延缓SiO2刺激所致RLE-6TN间质转化,下调FN、COLⅠ和COLⅢ等胶原纤维的表达,影响肺纤维化的进展。