ERK干扰质粒的构建及对胃癌细胞株BGC823 DcR3表达的影响

摘要

目的探讨胃癌发展的分子机制,通过构建ERK1/2shRNA真核表达载体,体外研究其对人胃癌细胞株BGC823ERK1/2蛋白及DcR3表达水平的影响。方法应用PRNAT-U6.1/Neo载体构建ERK1/2基因shRNA重组质粒,经脂质体法导入BGC823细胞中,分别设置对照组、干扰组和U0126抑制剂组。Westernblot法检测转染后BGC823细胞及抑制剂使用后ERK1/2蛋白的表达变化,荧光显微镜检测质粒自带GFP基因的表达情况确认转染效率,ELISA法检测各组细胞上清中DcR3分泌蛋白的表达特点。结果成功构建ERK1/2基因shRNA重组质粒。证明了ERK1/2蛋白的表达与DcR3的分泌水平在BGC823细胞株中呈正相关。结论 ERK1/2干扰质粒明显降低BGC823细胞的ERK1/2蛋白表达水平,ERK信号通路对DcR3的分泌具有重要调控作用,为其下游调控机制的研究奠定了基础。