ID-UPLC-MS/MS检测大鼠尿液DNA氧化标志物8-oxodGuo方法的建立

摘要

目的建立一种快速、高效的同位素稀释超高效液相-串联质谱法(ID-UPLC-MS/MS),用于检测大鼠尿液中DNA氧化产物8-羟基脱氧鸟苷(8-oxodGuo)。方法大鼠尿液经10 mmol/L的醋酸铵处理,加入同位素内标[^(15)N_(5)]8-oxodGuo,置于37℃生化培养箱孵育,离心后以5 mmol/L的醋酸铵(含0.1%甲酸)和甲醇为流动相,经色谱柱SB-Aq(3.0 mm×100.0 mm,1.8μm)分离,在MRM模式下监测m/z 284/168(8-oxodGuo)及m/z 289/173([^(15)N_(5)]8-oxodGuo),进行内标法定量。结果本检测方法在0.4~100 ng/mL线性范围内线性关系良好,相关系数为0.9996,定量下限为0.2 pg,低、中、高3个浓度(0.4、10和100 ng/mL)的回收率分别为(110.30±7.83)%,(104.37±2.22)%,(99.26±1.18)%,相对标准偏差为1.1%~7.1%。结论该检测方法简便、灵敏、快速、高效,可较好地应用于评价机体氧化应激所导致的DNA氧化损伤。