人源化抗血管内皮生长因子单克隆抗体质控方法的建立

摘要

目的建立人源化抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)单克隆抗体的质控方法。方法采用还原/非还原型毛细管凝胶电泳(CE-SDS)测定人源化抗VEGF单抗的纯度;在0.5和25.0 mg·m L^(-1)浓度条件下,采用分子排阻高效液相色谱(SE-HPLC)测定制品中单体和聚合物含量;毛细管等电聚焦电泳(c IEF)测定其等电点;阳离子交换高效色谱(CEXHPLC)测定电荷异构体含量;反相高效色谱(RP-HPLC)和LC-MS检测Lys-C酶切后制品肽图;人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,Hu VEC)增殖抑制试验测定其生物学活性;其余项目按照2015年版《中国药典》要求进行。结果人源化抗VEGF单抗原液和成品的还原型CE-SDS的纯度分别(97.77±0.25)%和(97.43±0.57)%,非还原型CE-SDS纯度分别为(98.97±0.15)%和(98.73±0.06)%;0.5 mg·m L^(-1)浓度下,原液和成品的单体含量分别为(98.07±0.55)%和(98.20±0.52)%;25.0 mg·m L^(-1)浓度下,原液和成品的聚合物含量分别为(2.00±0.53)%和(1.93±0.55)%;CEX-HPLC检测原液和成品的酸性区含量分别为(18.33±0.64)%和(18.60±0.44)%,主峰含量分别为(69.03±0.80)%和(69.20±0.44)%,碱性区含量分别为(12.70±1.37)%和(12.20±0.87)%;c IEF和LC-MS测定原液和成品的等电点和肽图均与参比品一致;HUVEC增殖抑制法测定原液和成品的生物学活性分别为参比品的(107±6)%和(100±10)%。其他各项指标均符合《中国药典》要求及其他相关要求。结论初步建立了人源化抗VEGF单克隆抗体的质控方法,可用于该制品的常规质量控制。