重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白质控方法和质量标准研究

摘要

目的建立酵母表达的重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白的质控方法和质量标准。方法采用荧光素酶报告基因法进行效价测定;分别用非还原聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和分子筛液相色谱(SE-HPLC)测定纯度;反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行原液肽图分析;荧光定量PCR方法测定外源DNA残留量;液质联用技术分析重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白理化对照品的相对分子质量和氨基酸序列;其余检测项目按《中国药典》2010年版三部规定进行。结果用建立的方法对重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白3批原液、3批成品及1批理化对照品进行了质量控制研究,建立了针对该制品原液和成品的质量标准,原液和成品的检验结果均在质量标准控制范围内,符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和《中国药典》2010年版三部的要求;理化对照品质谱相对分子质量测定结果为71 361.0,与理论相对分子质量一致,氨基酸序列覆盖率达到97%。结论建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定。