新的核苷类化合物β-L-D4A及其异构体体外抗HBV作用

摘要

目的探索比较β-L-D4A(L-D4A)及其异构体体外抗HBV作用,以期获得高效、高治疗指数(TI)的新一类抗HBV化合物。方法L-D4A及其异构体干预2.2.15细胞(Hep G2细胞进行HBV基因组转染后所得)培养,ELISA法检测上清HBs Ag, HBe Ag;32p标记HBV DNA为探针,Southern印迹法检测上清液及细胞内HBV DNA,再以计算机图像处理进行定量分析,求出50%抑制的药物浓度(ED50)。洗去HBV探针后,以32P标记细胞色素氧化酶ⅢDNA为探针再次进行杂交,以探索线粒体的毒性。以MTT法检测不同浓度药物的细胞毒性,求出50%细胞抑制的药物浓度(ID50)。结果上清液病毒DNA的Southern印迹结果显示,L型异构体较之D型异构体具有更强的HBV DNA抑制作用,L-D4A最为突出,并呈显明显的浓度依赖性,计算出ED50为0.2μmol·L-1;D-D4A具有明显的线粒体毒性,L-D4A则不明显;L-D4A细胞毒性实验显示ID50为200μmol·L-1;低浓度L-D4A对上清HBs Ag,HBe Ag无明显的影响,高浓度时有显著的抑制作用。结论体外实验显示L-D4A具有明显的抑制病毒DNA复制作用,且无明显的细胞毒性和线粒体毒性,TI(ID50/ED50)值为1 000,高于拉米夫定组(TI值为750),将有望进一步得到开发。