人细胞角蛋白19片段单克隆抗体的制备和鉴定

摘要

10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.06.005%　　目的制备人细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)的单克隆抗体(mAb),并对其免疫特性进行鉴定.方法用重组 CYFRA21-1蛋白免疫 BALB/c 小鼠,取血清效价最高小鼠的脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞 SP2/0融合,筛选出阳性杂交瘤细胞株,进行亚克隆,并鉴定分泌抗体亚型；制备小鼠腹水,用 protein G 从腹水中纯化出CYFRA21-1的 mAb；用间接 ELISA 测定 mAb 的效价, Western blot 和竞争 ELISA 对 mAb 的免疫特性进行检测,竞争 ELISA 对 mAb 的临床应用性进行评价.结果获得2G8和12G7两株能稳定分泌人 CYFRA21-1 mAb 的杂交瘤细胞株,其分泌抗体都为轻链为κ的 IgG1；两株 mAb 都能特异识别人血清中的 CYFRA21-1,效价分别为1×10-6和5×10-7；检测134份血清样本 CYFRA21-1含量的结果与北京源德生物医学工程有限公司 CYFRA21-1化学发光法定量检测试剂盒检测结果的相关性分别为 y =0.8167 x+0.3755(r=0.9772)和 y=0.8142 x+0.3655(r=0.9770).结论成功制备两株人 CYFRA21-1的特异 mAb,为后期人血清 CYFRA21-1定量测定试剂盒的完全国产化奠定了良好的基础.