Ⅱ型登革病毒E基因的克隆及其酵母表达

摘要

目的克隆2型登革病毒E基因并用酵母真核表达,获得全长的重组E蛋白,为其结构与功能的研究提供条件.方法从感染DEN2(NGC株)后病变的C6/36细胞上清中提取RNA,通过RT-PCR扩增E基因片段,与载体pPICZαB连接筛选得到重组质粒,电穿孔法将重组体整合入酵母菌P.pastoris,经抗生素Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定,取Mut+菌诱导表达,SDS-PAGE、免疫印迹检测表达产物.结果 RT-PCR得到1.5 kb的E基因片段,酶切鉴定与测序显示重组质粒含DEN2全长E基因;Mut+酵母转化菌可分泌表达约69 kDa的蛋白,与DEN2 E单抗的免疫印迹证实它为型特异的重组E蛋白.结论成功将克隆的全长DEN2 E基因在酵母菌中表达,获得的重组E蛋白具有免疫反应性.