大鼠天然抗体相关的弓形虫抗原基因的免疫筛选与克隆

摘要

目的研究大鼠对弓形虫感染的天然抗性分子,为弓形虫病疫苗的研制提供新的抗原分子.方法用正常大鼠血清作为探针筛选弓形虫速殖子cDNA文库,对阳性克隆的插入片段分别进行PCR扩增及DNA序列测定.结果从cDNA文库2×105个噬菌斑中筛选出5个阳性克隆,其插入片段大小分别为0.55～1.8kb.对P1、P4、P6和P8四个克隆进行测序,将所得序列查询基因序,结果显示:P8与弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)基因相同.P4为弓形虫的新基因序列(GenBank中的登录号为AY349162),命名为T.g P4.T.g-P4编码96个氨基酸的跨膜蛋白.PROSCAN分析显示T.g-P4含有4个蛋白激酶C磷酸化位点,3个N-肉豆酸酰化位点,1个核糖体蛋白L29信号.P1和P6为新基因片段.阳性克隆的分子鉴定正在进行中.结论阳性克隆的筛选和鉴定为抗弓形虫病疫苗的研制奠定基础.