问号钩端螺旋体检测基因芯片的研制

摘要

目的制备一种用于快速检测、鉴定问号钩端螺旋体的DNA微阵列芯片.方法从Genbank中选取钩体23SrDNA序列,设计一对种特异性引物和DNA探针,通过Blast的基因同源性比较,验证引物和探针的通用性与特异性.将合成的探针点样到玻片上制备成基因芯片.用Cy3标记引物,通过不对称PCR反应获取荧光素标记的靶序列,然后与制备的芯片杂交.结果设计的引物与探针仅同时与问号钩体23srDNA完全同源.该引物可扩增我国18个血清群的25株钩体,均出现单一482 bp的扩增产物,而双曲钩体及其他螺旋体、病原、空白对照均无任何DNA扩增条带.芯片杂交结果与常规PCR方法结果一致,敏感性高于PCR.结论基因芯片可以快速、灵敏、特异地检测问号钩端螺旋体.