淡色库蚊细胞色素P450 CYP4E2r6基因的克隆、表达及鉴定

摘要

目的克隆并表达鉴定淡色库蚊细胞色素P450 (CYP4E2r6) 基因.方法根据昆虫细胞色素P450氨基酸保守序列设计一对简并引物,采用RT-PCR,从淡色库蚊四龄幼虫mRNA中扩增出目的基因片段.产物经T-A克隆、测序、比对,在抗性品系高表达的CYP4E2r6亚克隆入原核表达载体pGEX-6P1,在大肠杆菌BL21中进行原核表达,将细菌总蛋白进行SDS-PAGE及Western blot鉴定.结果 14个阳性克隆中9个为CYP4新序列, 由GenBank登录上网(GenBank/NCBI CB074944-51、CB270837,2003年);经鉴定属CYP4家族CYP4H、CYP4E、CYP4J亚家族;CYP4E2r6基因已成功表达.结论获得的CYP4E2r6融合表达蛋白为进一步研究CYP4基因与抗药性之间的关系奠定基础.