柯萨奇病毒B3型VP1基因在酿酒酵母中的表达

摘要

目的在酿酒酵母AH109中表达柯萨奇病毒B3型VP1基因,并检测VP1蛋白对报告基因的转录自激活作用.方法用乙酸锂法将重组柯萨奇B3病毒VP1基因的细菌-酵母菌穿梭载体pGBKT7-VP1转化酵母菌.通过表型鉴定、PCR法验证质粒导入宿主菌后,Western blotting验证VP1蛋白的表达,最后经营养缺陷培养基和酶底物X-α-Gal反应检测VP1基因对报告基因的转录自激活作用.结果表型鉴定和PCR法均证实pGBKT7-VP1质粒转入酵母菌成功,Western blotting证实AH109能表达VP1蛋白,营养缺陷型培养基和酶底物X-α-Gal反应结果显示VP1蛋白对3种报告基因均无转录自激活作用.结论柯萨奇病毒B3 型VP1蛋白可作为酵母双杂交系统的诱饵蛋白,为筛选与其相互作用的宿主细胞蛋白提供了基础.