结核分枝杆菌HSP65与IL-2融合蛋白的表达和纯化

摘要

目的 获得融合表达的结核分枝杆菌热休克蛋白65与人白细胞介素2的重组蛋白,为进一步研究其对结核疫苗的作用奠定基础.方法 用PCR的方法分别从H37Rv DNA和质粒pGEM-Teasy-IL-2中扩增目的基因片段hsp65和IL-2,将各目的片段克隆至pMD18-T载体中进行测序,将测序正确的目的基因片段分别经EcoRⅠ和ClaⅠ,ClaⅠ和HindⅢ双酶切后亚克隆至原核表达载体pPro-EX Hta,转化大肠杆菌DH5α,挑选阳性克隆,经IPTG诱导后进行融合表达,并通过镍柱对融合蛋白进行纯化.结果 PCR法扩增获得的各目的基因片段与GenBank报道的一致.构建的融合蛋白原核表达载体在大肠杆菌中表达后,经SDS-PAGE和Western-blot分析,在Mr 78000处有特异性的蛋白表达条带.用镍柱进行亲和层析纯化后得到了高纯度的HSP65-IL-2融合蛋白.结论 成功的构建了结核分枝杆菌HSP65与人IL-2的融合表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达,有望为结核的预防提供有效的疫苗.