乳酸乳球菌食品级载体的构建及Mn-SOD基因的克隆和表达

摘要

目的构建乳酸乳球菌(L. lactis)食品级载体,并利用其表达锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD).方法 PCR方法扩增L. lactis subsp.cremoris Wg2的隐性质粒pWV01的复制子、L. lactis MG1363的thyA基因及质粒pUC18的多克隆位点,PCR方法连接后构建食品级载体pSH91,CaCl2 法转化大肠杆菌X51菌株.提取质粒pSH91电转化L.lactis MBP71(△thyA),检测转化子在改良SA培养基上的生长能力.PCR扩增L. lactis MG1363菌株的sodA基因(含自身启动子),克隆到质粒pSH91中,构建食品级表达载体pSH91:SOD,电转化L. lactis MBP71,黄嘌呤氧化酶法测定转化子L. lactis MBP71/pSH91:SOD的SOD酶活性.结果经PCR扩增、连接、鉴定,食品级载体pSH91构建成功;转化L. lactis MBP71后,突变株回复了在改良SA培养基上生长能力,并且其生长速率和酸化能力与野生株相似.PCR扩增得到sodA基因并克隆入pSH91,构建了食品级表达载体pSH91:SOD.重组菌L. lactis MBP71/pSH91:SOD 的SOD酶活性较出发菌株L. lactis MBP71高10余倍.结论成功构建了食品级载体pSH91;利用该载体可在L. lactis中表达Mn-SOD等外源蛋白.