微小隐孢子虫T7噬菌体展示文库的构建

摘要

目的为筛选微小隐孢子虫保护性抗原基因,构建了微小隐孢子虫T7噬菌体展示文库.方法用Trizol 试剂提取微小隐孢子虫总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA.在双链cDNA末端加上定向EcoRⅠ/Hind Ⅲ接头,用EcoRⅠ和Hind Ⅲ消化接头,使形成两端分别带有EcoRⅠ和Hind Ⅲ粘性末端的双链cDNA.经Mini Column纯化,收集400 bp 以上的双链cDNA 片段,将其连接于带有EcoRⅠ和HindⅢ末端的T7Select 10-3b 载体,经体外包装后,以BLT5403为受体菌构建T7噬菌体展示文库.结果经测定,库容量为1.2×107 pfu/mL,重组率为96.7%,扩增后文库滴度为2.4×1010pfu/mL.对随机挑取的100 个噬菌斑进行PCR 鉴定,92%的插入片段大于400bp.结论成功构建了微小隐孢子虫T7噬菌体展示文库.