旋毛虫肌幼虫p45cDNA的克隆及鉴定

摘要

目的 本研究根据GenBank中旋毛虫45 kDa抗原基因的序列设计引物,采用PCR技术从旋毛虫肌幼虫cDNA文库中扩增靶基因p45 cDNA,并克隆到pMD-18T载体,转化至大肠埃希氏菌NovaBlue后测序分析.获得827bp的p45 cDNA.该序列与GenBank中的旋毛虫p45基因序列相比共有1个核苷酸发生改变,二者的同源性为99%,其编码蛋白质由268个氨基酸组成,与45kDa抗原的同源性为99%.将p45cDNA克隆到原核表达载体pET28a并转化至表达菌BL21star(DE3)后,经IPTG诱导表达出约30 kDa的重组蛋白.Western-blot检测表明,p45重组蛋白可以被旋毛虫感染猪血清识别,具有良好的抗原性.