阴道毛滴虫黏附蛋白65基因的克隆、表达及免疫反应性鉴定

摘要

目的 通过构建原核表达载体,获得阴道毛滴虫黏附蛋白65基因重组融合蛋白.方法 分离并纯化培养阴道毛滴虫临床分离株,提取其总RNA,经RT-PCR扩其全长序列基因,T-A克隆测序后,连接表达载体PET-28a(+).在E.coli(DE3)Plyss宿主菌中用不同浓度IPTG诱导目的蛋白的表达,采用Ni-NTA亲和层析法提纯AP65,SDS-PAGE检测表达和提纯效果.采用兔抗阴道毛滴虫全虫多抗鉴定其免疫反应性.结果 克隆ap65基因与GenBank公布基因同源性高,在1mmol/L IPTG诱导下,AP65产量可占细菌总蛋白量的23%,提纯后蛋白纯度达到90%以上,且重组蛋白AP65能与兔抗阴道毛滴虫全虫抗体发生特异性结合.结论 成功地构建了阴道毛滴虫ap65基因的原核表达系统,重组蛋白且有良好的免疫反应性,可为疫苗抗原的筛选及单克隆抗体的制备奠定基础.