日本血吸虫卵壳蛋白前体基因Sj423的克隆表达及分析

摘要

据日本血吸虫菲律宾株编码卵壳前体蛋白的一段230bp 的序列设计PCR引物,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板,用RT-PCR方法扩增出日本血吸虫中国大陆株相应的基因片段、然后根据测序结果设计一系列引物,用5'RACE 和3'RACE 法扩增出该基因cDNA的5' 和3'端,再根据测序结果设计全长引物,用RT-PCR方法扩增出大小为423 bp的片段.经序列分析推断该基因片段为编码日本血吸虫中国大陆株卵壳前体蛋白基因的完整阅读框,对相应基因组区段测序证实该基因没有内含子(GenBank登录号:AF519182).将其克隆到表达载体pET28c(+)中,在大肠杆菌中获得表达,融合表达产物分子量约为20.9 kD.Real-time PCR结果显示该蛋白在尾蚴感染宿主后第23d即卵壳形成时高表达.利用日本血吸虫成虫抗原免疫血清对该表达产物进行Western 印迹检测,在预测位置出现了明显的识别条带,说明该编码日本血吸虫中国大陆株抱雌沟蛋白基因的表达产物具有抗原性.