变性高效液相色谱检测空肠弯曲菌

摘要

目的 应用多重PCR反应(multiplex PCR, mPCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography, DHPLC)技术建立食品中空肠弯曲菌的快速检测方法.方法 以编码嗜热弯曲菌属的16S rRNA基因、编码空肠弯曲菌的gyrA基因为靶基因,选择2对引物,建立并优化了鉴别空肠弯曲菌的多重PCR体系,扩增产物分别为287 bp、159 bp.采用22株细菌验证了该多重PCR具有特异性.PCR检测的灵敏度在DNA水平上达到10 pg/μL;在人工模拟污染样品起始污染浓度为1.5个/mL时,42℃微需氧条件下培养24 h可被检出.结果 在随机采集的172份冷冻鸡肉类样品中,检出了18份样品为空肠弯曲菌阳性.结论 本研究建立的多重PCR-DHPLC方法 可特异、灵敏地实现对空肠弯曲菌的快速检测.