出血性大肠杆菌O157主要毒力因子单克隆抗体的制备

摘要

目的 利用两种抗原制备针对出血性大肠杆菌EHEC O157主要毒力因子的特异性单克隆抗体.方法 分别用纯化融合蛋白Eae-Stx1/2B和EHEC O157Δler/stx(Pbr322::stx1/2B::eae)全菌免疫BALB/C小鼠,通过细胞融合和EHEC O157标准株EDL933间接ELISA筛选稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株,纯化抗体并鉴定.结果 纯化融合蛋白免疫获得了2株单抗2H9和3B4,EHEC O157Δler/stx(Pbr322::stx1/2B::eae)免疫获得了1株单抗4H7.2H9、3B4和4H7亚类鉴定分别为lgG2b、lgM和lgM;纯化腹水ELISA效价分别为1∶1.28×105、1∶3.2×104、1∶6.4×104,亲和力常数分别为2.9×106、1.4×106、2.6×105.结论 3株单克隆抗体均具有较高特异性,2H9效价和亲和力最高,可作为产志贺毒素EHEC O157的检测抗体.