六点始叶螨内参基因筛选及其在超氧化物歧化酶基因EsSOD表达分析中的应用

摘要

为了筛选稳定内参基因分析六点始叶螨超氧化物歧化酶基因EsSOD的表达量,本研究采用geNorm、Bestkeeper、Normfinder和RefFinder软件分析6个候选内参基因actin、gapdh、rpl13、α-tub、β-tub和18sRNA在六点始叶螨幼螨、前若螨、后若螨和雌成螨中的表达稳定性.结果表明,根据geNorm软件分析得出6个候选内参引物的稳定性从大到小的排序为:actin＞β-tub＞rpl13＞α-tub＞gapdh＞ 18sRNA;根据NormFinder软件分析得出的稳定性从大到小的排序为:rpl13＞β-tub＞actin＞α-tub＞ 18sRNA＞gapdh;根据BestKeeper软件分析得出的稳定性从大到小的排序为:β-tub＞rpl13＞actin＞gapdh＞α-tub＞ 18sRNA;最终根据RefFinder软件的综合分析结果,actin和β-tub是稳定性最佳的2个内参引物.分别以actin和β-tub为内参进行EsSOD基因表达量的RT-qPCR分析,结果表明,与取食感螨橡胶树种质'IAN2904'后EsSOD表达量相比,不同龄期六点始叶螨取食抗螨橡胶树种质'IRCI12' 后EsSOD表达量均降低.本研究获得了可用于六点始叶螨EsSOD表达量分析的稳定内参引物,为橡胶树种质抗螨性分子机理研究奠定了理论基础.