青天葵独脚金内酯信号转导关键基因D14的克隆与亚细胞定位分析

摘要

D14基因是独脚金内酯信号转导途径的关键基因,其编码的蛋白能够使SLs释放出活性小分子物质而发挥调节腋芽起始的功能.本研究根据其他物种的D14基因从青天葵转录组数据中筛选获得2条高度同源的片段,命名为NfD14a和NfD14b.应用RT-PCR和RACE技术,克隆获得NfD14a和NfD14b的cDNA全长序列,GenBank登录号分别为MH028026、MH028027.NfD14a基因全长1206 bp,ORF为861 bp,编码286个氨基酸;NfD14b基因全长1082 bp,ORF为813 bp,编码270个氨基酸.对NfD14的编码蛋白序列进行了生物信息学分析,结果表明:NfD14a和NfD14b均属于α/β折叠蛋白水解酶超家族成员(Abhydrolase superfamily),但系统进化分析结果表明两者同源性不高.利用一步快速克隆的方法构建了植物表达载体35S::NfD14a-EGFP和35S::NfD14b-EGFP,并分别获得其工程菌.瞬时表达结果表明,NfD14a和NfD14b均定位在烟草原生质体的细胞核和细胞质.本研究通过对NfD14基因全长cDNA序列的克隆与亚细胞定位分析,为青天葵独脚金内酯信号转导途径调控植物分枝生长发育机制的研究奠定基础.