ACE2基因过表达减轻血管紧张素Ⅱ诱导的神经细胞氧化应激

摘要

目的:探讨过表达血管紧张素转换酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)基因对血管紧张素II(angiotensin II,Ang II)诱导的小鼠神经母细胞瘤Neuro-2A细胞氧化应激和NADPH氧化酶(NADPH oxidase,NOX)表达的影响.方法:构建ACE2重组慢病毒载体,以感染复数(multiplicity of infection,MOI)=10转染Neuro-2A细胞72 h,测定ACE2基因转染效率和ACE2蛋白表达,并检测神经细胞标志物以鉴定Neuro-2A细胞.Neuro-2A细胞分为7组:空白对照(control)组、慢病毒载体(eGFP)组、重组ACE2(ACE2-eGFP)组、AngⅡ刺激(Ang II)组、Ang II+慢病毒载体(Ang II-eGFP)组、Ang II+ACE2(Ang II-ACE2-eGFP)组和Ang II+重组ACE2+A779(Ang II-ACE2-eGFP-A779)组.采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定Ang(1-7)水平,DHE染色法检测活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot检测MAS受体及NOX亚基(NOX2、NOX4、p47phox和p67phox)蛋白表达.结果:AngⅡ显著增加Neuro-2A细胞ROS水平(P<0.01),上调NOX2、NOX4、p47phox和p67phox蛋白表达(P<0.01),但下调MAS蛋白表达(P<0.01).ACE2过表达抑制AngⅡ诱导的ROS增加(P<0.05),下调NOX2、NOX4、p47phox和p67phox蛋白表达(P<0.01),还可增加神经细胞Ang(1-7)含量(P<0.01)和MAS受体表达(P<0.01).MAS受体拮抗剂A779能阻断ACE2下调NOX表达的作用(P<0.05).结论:ACE2过表达通过MAS受体对抗AngⅡ诱导的神经细胞氧化应激.