淋病奈瑟菌临床菌株外膜蛋白PIA基因序列分析及原核表达系统的构建

摘要

目的:分析本地区淋病奈瑟菌临床菌株外膜蛋白PIA基因核苷酸及氨基酸序列,构建PIA基因的原核表达系统.方法:采用高保真PCR扩增9株淋病奈瑟菌全长PIA基因序列,T-A克隆测序后与GenBank公布的序列进行同源性比较.构建PIA原核表达系统.采用不同浓度IPTG诱导重组目的蛋白rPIA表达,10%SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶图像分析系统检测rPIA表达情况.采用Ni-NTA亲和层析法提纯rPIA,SDS-PAGE检测提纯效果.结果:与报道的PIA基因序列(GenBank No:L19962)比较,9株淋病奈瑟菌核苷酸和氨基酸序列相似性分别高达99.6%-100%和99.1%-100%,均属于IA6血清型.rPIA表达量可占细菌总蛋白量的50.1%,提纯后仅显示单一的目的蛋白条带.结论:IA6为本地区淋病奈瑟菌优势血清型,该基因序列相当保守.所构建的PIA基因原核表达系统能高效表达rPIA,为今后研制淋病奈瑟菌血清学检测试剂盒及疫苗研制奠定了基础.