基于'脾肾相关'理论防治模拟失重大鼠Wnt信号通路介导的骨形成机制研究

摘要

目的 基于"脾肾相关"理论考察健脾方药、补肾方药和补肾健脾方药对尾吊模拟失重大鼠骨丢失的防治作用,并揭示其分子机制.方法 50只大鼠随机分成空白对照组、尾吊组、健脾组、补肾组、补肾健脾组,每组10只.除空白对照组外,其余各组大鼠均以尾部悬吊法造模,同时对中药干预的各组大鼠予以相应方药灌胃.实验第28天称体重并取材,取大鼠双侧股骨和胫骨并称重,检测大鼠股骨和胫骨骨密度和生物力学性能,Western Blot方法检测大鼠胫骨内碱性磷酸酶(ALP)、骨连接蛋白(SPARC)、转录激活子4(ATF4)、β-连环蛋白(β-catenin)、分泌型糖蛋白(DKK1)、含环蛋白的跨膜蛋白2(Kremen2)、分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)蛋白表达量.结果 与空白对照组比,尾吊组大鼠股骨和胫骨生物力学性能降低(P<0.05),胫骨和股骨与体重比值、骨密度、胫骨ALP、SPARC、ATF4、β-catenin、SFRP2蛋白表达量显著降低(P<0.01),DKK1、Kremen2蛋白表达量显著升高(P<0.01);与尾吊组比,健脾组、补肾组、补肾健脾组大鼠的胫骨和股骨与体重的比值、骨密度、生物力学性能、胫骨中ALP、SPARC、ATF4蛋白表达量升高,Kremen2蛋白表达量降低(P<0.05),健脾组和补肾健脾组大鼠胫骨β-catenin蛋白表达量显著升高(P<0.01),补肾组和补肾健脾组大鼠胫骨SFRP2蛋白表达量显著升高(P<0.01),DKK1蛋白表达量显著降低(P<0.01);与补肾健脾组比,补肾组和健脾组大鼠的胫骨和股骨与体重比值、骨密度、股骨生物力学性能、胫骨ALP、SPARC、ATF4蛋白表达量降低(P<0.05),补肾组大鼠胫骨生物力学性能、β-catenin蛋白表达量降低、Kremen2蛋白表达量升高(P<0.05),健脾组大鼠胫骨SFRP2蛋白表达量降低、DKK1蛋白表达量升高(P<0.05).结论 基于"脾肾相关"理论采用的补肾健脾方、补肾方和健脾方均能对抗尾吊模拟失重导致的骨丢失,以补肾健脾方作用为优,作用机制可能与激活经典Wnt信号通路有关.三首方剂作用于经典Wnt信号通路上的靶点略有差异.