放射联合替莫唑胺治疗对U87-EGFRvⅢ细胞及其移植瘤影响的实验研究

摘要

目的 通过体外、体内实验观察放射联合替莫唑胺治疗对胶质瘤U87-表皮生长因子受体的Ⅲ型突变体（EGFRvⅢ）细胞及其移植瘤的影响。方法 （1）常规培养人脑胶质瘤U87-EGFRvⅢ细胞,CCK-8实验检测不同浓度的替莫唑胺对U87-EGFRvⅢ细胞增殖的影响,计算替莫唑胺的半抑制浓度（IC50）；将细胞分为对照组、6 Gy放射治疗组、12 Gy放射治疗组,分别以0、6、12 Gy边缘剂量照射后应用Western blotting实验检测3组细胞侵袭相关蛋白和基因修复相关蛋白的表达；将细胞分为对照组、6 Gy放射治疗组、6 Gy放射联合替莫唑胺治疗组（经6 Gy剂量照射后加入5 mmol/L替莫唑胺）,24 h后应用Western blotting实验检测3组细胞侵袭相关蛋白和基因修复相关蛋白的表达；（2）应用对照组、6 Gy放射治疗组、6 Gy放射联合替莫唑胺治疗组细胞悬液制作裸鼠颅内移植胶质瘤模型,移植后第7、14、21天应用生物发光成像（BLI）检测裸鼠体内荧光素酶的表达并测量移植瘤体积,绘制裸鼠的生存曲线、体质量曲线。免疫组化染色检测颅内移植胶质瘤EGFRvⅢ、EGFR、基质金属蛋白酶（MMP）-9、血管内皮生长因子（VEGF）、Ki67的表达。结果 （1）替莫唑胺对U87-EGFRvⅢ细胞的IC50为5 mmol/L；与对照组比较,6 Gy放射治疗组细胞EGFRvⅢ、EGFR、MMP-2、MMP-9、VEGF、MGMT、蛋白激酶B（AKT）-1、β-链蛋白（β-catenin）和Ku70蛋白的表达增加,与6 Gy放射治疗组比较,12 Gy放射治疗组细胞EGFRvⅢ、EGFR、MMP-2、MMP-9、VEGF、6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）、AKT-1、β-catenin和Ku70蛋白的表达降低,差异均有统计学意义（P＆0.05）；与6 Gy放射治疗组比较,6 Gy放射联合替莫唑胺治疗组细胞EGFRvⅢ、EGFR、MMP-2、MMP-9、VEGF、MGMT、AKT-1、β-catenin和Ku70蛋白的表达降低,差异均有统计学意义（P＆0.05）。（2）与对照组、6 Gy放射治疗组比较,6 Gy放射联合替莫唑胺治疗组细胞的成瘤性低,移植后21 d生存率、体质量均较高。裸鼠移植瘤的体积较小,差异有统计学意义（P＆ 0.05）；对照组、6 Gy放射治疗组、6 Gy放射联合替莫唑胺治疗组裸鼠肿瘤组织EGFRvⅢ、EGFR、MMP-9、VEGF和Ki67的表达依次降低,差异有统计学意义（P＆0.05）。结论 放射联合替莫唑胺治疗可以更好地抑制U87-EGFRvⅢ细胞及其移植瘤的侵袭和增殖能力。