构建睫状神经营养因子和绿色荧光蛋白基因转导的重组腺病毒载体

摘要

目的以重组腺病毒（rAd）为载体构建腺病毒—睫状神经营养因子—内部核糖体进入位点—绿色荧光蛋白（Ad-CNTF-IRES-GFP）。方法先构建Psp-CNTF-IRES-GFP质粒,再制备PDC316-CNTF-IRES-GFP质粒,然后在脂质体的作用下,用构建好的PDC316-CNTF-IRES-GFP质粒与骨架质粒PBHG在293-LP细胞中构建Ad-CNTF-IRES-GFP腺病毒,并扩增、纯化,鉴定病毒活性。最后,将Ad-CNTF-IRES-GFP转染人源性骨髓间充质细胞（MSCs）,观察MSCs的CNTF表达情况。结果成功扩增CNTF基因,扩增后的CNTF基因与基因文库序列完全相符;成功制备PDC316-CNTF-IRES-GFP质粒及Ad-CNTF-IRES-GFP腺病毒,测得Ad-CNTF-IRES-GFP腺病毒的病毒活性单位（pfu）为2.3×10~11;构建好的Ad-CNTF-IRES-GFP成功转染MSCs,而且转染后的MSCs表达CNTF的量为未转染MSCs表达量的20倍。结论本方法能够成功构建Ad-CNTF-IRES-GFP腺病毒载体,而且转染后的MSCs高度表达CNTF。