小鼠HMGB1启动子红色荧光蛋白报告基因载体的构建及在真核细胞中的表达

摘要

目的构建小鼠高迁移率族蛋白B1（HMGB1）启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,为研究细胞内HMGB1的基因表达调控和相关的信号转导机制提供重要工具。方法采用基因重组技术构建含HMGB1启动子区的红色荧光蛋白报告基因载体pDsRed1-1-HMGB1p;脂质体法瞬时转染NIH3T3细胞,观察HMGB1启动子在正常情况下以及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）刺激后的细胞内活性。结果酶切鉴定和DNA测序证明所构建的红色荧光蛋白报告基因载体正确;该载体在NIH3T3细胞内静息状态呈低水平表达,经TNF-α刺激后,观察到表达高亮度红色荧光的细胞明显增多。结论所构建的HMGB1启动子红色荧光蛋白报告基因载体正确,具有正常启动蛋白表达的活性,可有效用于HMGB1基因表达信号调控机制的研究。