BDNF-TAT融合蛋白在大肠杆菌中的表达纯化及脑中分布

摘要

目的在大肠杆菌中表达并纯化BDNF-TAT融合蛋白,研究其靶向性及在脑中的分布。方法重组质粒PET-30（a）-BDNF-TAT转染至大肠杆菌BL21（DE3）pLysS中,IPTG诱导其表达后用SP-Sepharose阳离子交换柱纯化,纯化后蛋白用0.4mol/L精氨酸倍比稀释法复性。KM种小鼠采用随机数字表法分为给药组[尾静脉注射复性后BDNF-TAT融合蛋白4μg（适量生理盐水溶解）]、阴性对照组（尾静脉注射等体积生理盐水）和空白对照组（不进行任何处理）,每组各3只。3 h后提取小鼠脑组织全蛋白,Western blotting检测脑组织中BDNF-TAT表达,SABC免疫组化染色观察BDNF-TAT在脑组织中的分布。结果获得纯度约90%活性的BDNF-TAT融合蛋白。给药组BDNF-TAT蛋白的相对表达量为1.897±0.286,阴性对照组BDNF-TAT蛋白的相对表达量为0.615±0.234,空白对照组BDNF-TAT蛋白的相对表达量为0.335±0.154,比较差异有统计学意义（F=39.019,P=0.000）。免疫组化染色结果显示给药组BDNF-TAT主要分布于小鼠脑组织海马CA1、CA3和DG区,而阴性对照组和空白对照组中没有明显阳性染色。结论 BDNF-TAT融合蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式大量表达,并能通过外周给药靶向至小鼠脑组织。