NF-κB信号通路在法舒地尔诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元分化中的作用

摘要

目的探讨核转录因子-κB（NF-κB）信号通路在法舒地尔诱导大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）向神经元分化中的作用。方法取培养至少4代以上的大鼠:MSCs,分为无血清培养基对照组（A组）、法舒地尔组（B组）及法舒地尔+脂多糖组（C组）;A组只加无血清DMEM培养基,B组加诱导液（含终浓度200μmol/L法舒地尔的DMEM培养基900μL+10%胎牛血清100μL）,C组加诱导液（含终浓度200μmol/L法舒地尔和1000μg/L脂多糖的DMEM培养基900μL+10%胎牛血清100μL）;分别诱导6 h。随后采用倒置荧光显微镜观察各组细胞形态变化,采用细胞荧光免疫组化法检测神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经元微管结合蛋白（MAP-2）、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达,采用实时定量PCR（RT-PCR）检测cyclin D1 mRNA及MAP-2 mRNA的表达,采用Western blotting检测3组细胞cyclin D1及MAP-2蛋白的表达。结果 （1）A组MSCs基本保持扁平、突起稀少,B组及C组可见神经元样细胞明显增多,形成典型神经网络。其中B组MSCs向神经元分化速度快,C组MSCs向神经元分化速度较慢,神经元网络较B组稀少。（2）荧光免疫组化结果显示,与A组比较,B组及C组NSE与MAP-2表达量均明显增加,cyclinD1表达均明显下降,差异均有统计学意义（P＜0.05）。3组细胞的GFAP表达率均小于1%,差异无统计学意义（P＞0.05）。（3）RT-PCR与Western blotting结果显示,与A组比较,B组及C组的cyclinD1蛋白及mRNA表达均明显减少,MAP-2蛋白及mRNA表达均明显增加,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 NF-kB信号通路通过调节cyclin D1表达参与法舒地尔诱导大鼠MSCs向神经元分化的作用。