外泌体源性miR-124对神经元损伤后轴突再生相关因子表达的影响

摘要

目的探讨以外泌体为载体将miR-124递送给神经元的可能性及其对轴突再生相关因子表达的影响。方法将装载miR-124的质粒转染至HEK293细胞,并应用实时定量PCR（qPCR）鉴定转染效果。从转染了miR-124的HEK293细胞培养液上清液提取外泌体,应用电镜观察、Western blotting及qPCR鉴定外泌体及其中是否内含miR-124。将C57BL/6孕鼠胚胎皮层神经元体外培养7 d后分为4组:对照组、损伤组、损伤+不含miR-124外泌体组、损伤+内含miR-124外泌体组,其中后3组用移液器塑料滴头在培养板内划割造成机械性损伤,后2组分别将不含或内含miR-124的外泌体加入培养板内,继续培养72 h后分别应用qPCR和Western blotting检测各组神经元中miR-124及神经纤毛蛋白-1（NRP-1）、微管相关蛋白Tau、生长相关蛋白43（GAP-43）蛋白的表达。结果成功获得了内含miR-124的外泌体。损伤+内含miR-124外泌体组神经元中miR-124及NRP-1、GAP-43蛋白表达量均明显高于其他3组,损伤组和损伤+不含miR-124外泌体组神经元中miR-124及NRP-1、GAP-43蛋白表达量均明显高于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论外泌体可递送miR-124至机械性损伤后的小鼠皮层神经元并提高神经元中轴突再生相关因子NRP-1、GAP-43的表达。