自噬对脑缺血再灌注损伤后神经功能障碍恢复的影响

摘要

目的探讨自噬是否在脑缺血再灌注损伤后被激活,及其对神经功能障碍恢复的影响。方法参照Longa方法制备大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型。（1）将42只SD大鼠按随机数字表法分为空白1组（n=9）及模型1组（n=33）,模型1组又依据再灌注后取材时间不同分为再灌注后6 h、12 h、24 h、48 h、72 h亚组,每亚组6只。应用透射电镜观察空白1组（n=3）及模型1组再灌注后24 h亚组（n=3）大鼠海马组织细胞内超微结构变化及自噬体形成,应用Western blotting检测各组大鼠（n=6）海马组织中自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3（LC3）-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Beclin-1的表达。（2）将18只SD大鼠按随机数字表法分为空白2组、模型2组及自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）组[于MCAO术前60 min通过立体定位技术侧脑室注射3-MA 10μL（600 nmol）],每组6只。应用改良大鼠神经功能缺损评分（mNSS）于术后1 d、3 d、5 d、7 d时评估各组大鼠神经功能,应用HE染色观察各组大鼠术后7 d时海马组织病理改变。结果（1）模型1组再灌注后24h亚组大鼠海马组织中可清晰地观察到自噬体形成,呈多层膜状结构。与空白1组比较,模型1组各亚组大鼠海马组织中LC3-Ⅱ/Ⅰ比值（除72h亚组外）及Beclin-1的表达明显增高,差异均有统计学意义（P＜0.05）;与模型1组再灌注后24h亚组比较,其他亚组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值及Beclin-1的表达均明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。（2）与模型2组比较,3-MA组大鼠术后3 d、5 d、7 d时的mNSS评分均明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。HE染色显示,3-MA组较模型2组神经细胞损伤明显减轻,凋亡神经细胞数目明显减少[（14.00±2.10）/视野vs.（37.83±2.64）/视野],差异有统计学意义（P＜0.05）。结论自噬在脑缺血再灌注损伤后被激活,而抑制其激活可以减轻脑组织损伤,改善神经功能障碍。