应用激光共聚焦扫描显微镜测定缺氧对大鼠脑微血管内皮细胞Ca2＋含…

摘要

应用Ｕｌｔｉｍａ型激光共聚焦扫描显微镜、ｆｌｕｏ－３荧光探针，检测大鼠脑微血管内皮细胞在正常体外培养及缺氧培养时游离钙含量的动态变化。缺氧由培养液中加入２ｍｍｏｌ连二亚硫酸钠（Ｎａ２Ｓ２Ｏ４）同时充入Ｎ２（９５％）、ＣＯ２（５％）气体造成。实验结果发现，当缺氧１～２ｍｉｎ时，内皮细胞Ｃａ２＋含量迅速增加，２～３ｍｉｎ达高峰。此后，尽管内皮细胞仍处于缺氧条件，荧光强度却逐渐减弱。停止缺氧后，荧光强度曲线可趋于稳定。应用Ｎｉｋｏｎ倒置相差显微镜观察内皮细胞形态学变化，发现缺氧３～５ｍｉｎ，内皮细胞发生肿胀。缺氧８～１０ｍｉｎ，细胞表面有明显受损迹象。