登革病毒3型E蛋白的原核表达及抗体的制备

摘要

目的原核表达并纯化登革病毒3型（DENV-3）E蛋白,并用于制备其抗体。方法采用PCR技术克隆DENV-3 E蛋白基因,插入原核表达质粒载体pET-32a（+）,转化大肠杆菌Rosetta（DE3）,IPTG诱导表达。表达产物经纯化后,免疫家兔,制备DENV-3 E蛋白抗血清,并用于Westernblot鉴定。同时,采用ELISA测定其抗体效价,并初步应用于DENV-3的检测。结果重组表达载体经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为65×10~3,主要以包涵体形式表达;用纯化的包涵体蛋白免疫家兔后,获得的特异性抗血清效价为1:20 480,该血清可与DENV-3发生特异性反应。结论本研究原核表达并纯化了DENV-3 E蛋白,制备了高滴度的特异性兔抗血清。制备获得的DENV-3 E蛋白抗体可用于登革病毒的鉴定,为登革病毒相关研究奠定了基础。