1,4-苯醌诱导HL60细胞自噬及活性氧在自噬发生中的作用

摘要

目的研究1,4苯醌（1,4-BQ）能否诱导HL60细胞发生自噬以及活性氧（ROS）在自噬发生中的作用。方法 CCK8法检测不同浓度1,4-BQ对HL60细胞的毒性作用,并据此选择观察细胞自噬效应的适宜染毒浓度。将对数生长期细胞分为对照组、1,4-BQ染毒组（10μmol/L 1,4-BQ染毒24 h）、N-乙酰半胱氨酸（NAC）组（5 mmol/LNAC处理24 h）和1,4-BQ+NAC干预组（5 mmol/LNAC干预1 h后加10μmol/L1,4-BQ处理24 h）。吖啶橙染色检测自噬酸性囊泡,免疫荧光染色法定性检测自噬蛋白LC3的表达定位,蛋白免疫印迹法定量检测LC3和Beclin1的蛋白表达。结果 HL60细胞活力随着1,4-BQ浓度增加而逐渐下降,呈剂量-反应关系,与对照组比较,20.0、40.0μmol/L染毒组HL60细胞存活率明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。与对照组比较,1,4-BQ染毒组自噬酸性囊泡增多;免疫荧光定性检测结果显示,膜型LC3II蛋白表达增加。蛋白免疫印迹结果显示,1,4-BQ染毒组LC3和Beclin1蛋白表达增加,分别比对照组增加了12.4%和27%,差异有统计学意义（P＜0.05）。与1,4-BQ染毒组比较,1,4-BQ+NAC干预组自噬酸性囊泡明显减少,LC3和Beclin1蛋白表达下降,分别比1,4-BQ组下降了12.6%和22.6%,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 1,4-BQ可诱导HL60细胞发生自噬,其诱导的自噬至少部分来源于ROS途径,抗氧化剂可有效抑制自噬的发生。