DHA激活NADPH氧化酶/ROS/Nrf2通路诱导ARPE-19细胞表达HO-1

摘要

目的:观察二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA)诱导人视网膜色素上皮细胞表达血红素氧合酶(Heine oxygenase,HO)-1的分子机制.方法:培养人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19,加入30 ～ 100 μmol/L DHA作用4～24 h.Western blot检测HO-1的表达及NADPH氧化酶p47 ph“亚基的磷酸化;荧光探针H2DCFDA检测活性氧(Reactive oxygenspecies,ROS)的产生;免疫荧光分析Nrf2在细胞核及胞浆中的表达;最后采用NADPH氧化酶抑制剂DPI,ROS抑制剂NAC或采用siRNA干扰Nrf2表达,检测其对HO-1表达的影响.结果:100 μmol/L DHA作用ARPE-19细胞30 min即可诱导p47phox亚基的磷酸化,同时能增加细胞内ROS的含量;采用NADPH氧化酶抑制剂DPI处理后,ROS水平显著降低;免疫荧光实验显示DHA作用细胞2h后,可诱导Nrf2核转位,采用DPI或NAC处理后,Nrf2核转位水平明显减少;采用Nrf2 siRNA沉默其表达,或采用DPI或NAC处理后,可抑制DHA诱导ARPE-19细胞表达HO-1.结论:DHA可能通过NADPH氧化酶/ROS/Nrf2通路途径诱导视网膜色素上皮细胞表达HO-1,从而发挥对细胞的保护作用.